木耳孢子單核菌株培養(yǎng)性狀多態(tài)性研究

何培新1，申進文2，羅信昌3，楊繩桃4

(1河南職業(yè)技術師范學院生物工程系，河南新鄉(xiāng)453003； 2河南省科學院生物研究所，河南鄭州450008；3華中農業(yè)大學農業(yè)微生物農業(yè)部重點實驗室，湖北武漢430070； 4華中農業(yè)大學植物保護系中心實驗室，湖北武漢430070)

我國是世界上主要的木耳(Auricularia auricula)生產國，年產量占世界總產量的90％以上[1]。由于木耳菌絲生長較慢，抗雜能力較弱，嚴重影響了木耳的產量和質量，制約著木耳生產的持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展。為提高木耳的產量和質量，除改進生產工藝、優(yōu)化栽培條件、提高生產的機械化程度以外，還可以從育種著手，通過雜交育種選育抗雜能力強、生產性狀好的優(yōu)良栽培菌株。為此，雜交親本的選擇就非常重要。一般來說，親本性狀差異顯著，雜交后代的雜種優(yōu)勢就較明顯，獲得優(yōu)良雜交菌株的可能性就比較大。雜交育種一般選用優(yōu)缺點互補的親本孢子單核菌株進行雜交。由于孢子單核菌株是減數分裂的產物，經過親本DNA的交換和重組，菌株之間會產生較明顯的遺傳差異，雜交后代有可能會產生一些母本菌株所不具備的新的遺傳性狀以及優(yōu)于母本的很多生產性狀。因此，研究木耳孢子單核菌株之間遺傳性狀的多態(tài)性，探討這些遺傳性狀在雜交育種理想親本選擇上的應用，具有重要的理論意義和實際意義。

1材料和方法

1．1材料

1．1．1供試菌株

木耳Au-8菌株，河南職業(yè)技術師范學院應用微生物實驗室保藏菌種。

1．1．2供試培養(yǎng)基

栽培培養(yǎng)基：雜木屑45％，棉籽殼45％，麩皮8％，蔗糖1％，石膏1％，料水比1：1，用于 Au-8菌株小規(guī)模栽培。

完全培養(yǎng)基(CYM)：蛋白胨2g，酵母膏2g，硫酸鎂0．5g，磷酸二氫鉀0．46g，磷酸氫二鉀1．0g，葡萄糖20g，蒸餾水1000mL，瓊脂20g，用于Au-8菌株和孢子單核菌株菌絲培養(yǎng)。

1．2方法

1．2．1 Au-8孢子單核菌株的獲得

Au-8菌株經過代料栽培，獲得子實體，彈射擔孢子，擔孢子經稀釋分離獲得160個孢子萌發(fā)菌株。萌發(fā)菌株經插片培養(yǎng)，鏡檢，挑選出沒有鎖狀聯(lián)合的菌株，再進行細胞核熒光染色[2]，確定每個細胞只有一個細胞核的菌株為孢子單核菌株。鑒定出58個孢子單核菌株，隨機選擇38個用于本研究。

1．2．2菌絲生長勢和菌絲生長速度測定

將供試孢子單核菌株活化培養(yǎng)，取單核菌絲體(巾=0．6crn，帶有少量培養(yǎng)基)接種CYM平板，每個菌株3次重復，28"C恒溫培養(yǎng)，每天觀察記錄菌絲生長情況，測量菌落直徑，按照下列公式計算菌絲生長速度。

菌絲生長速度=(菌落直徑一O．6)／(2×菌絲生長天數)

1．2．3交配型測定

采用孢子單核菌株配對培養(yǎng)方法測定交配型[3]。

2結果與分析

2．1孢子單核菌株菌絲生長勢

根據菌絲生長情況，菌絲生長勢可分為5種類型。類型工(9個菌株)：菌絲絨毛狀，氣生菌絲旺盛，粗壯，濃密，色自；類型Ⅱ(11個菌株)：菌絲絨毛狀，氣生菌絲較旺盛，比較粗壯、濃密，色白；類型Ⅲ(13個菌株)：菌絲細絨毛狀，氣生菌絲旺盛，粗壯，較濃密，色白；類型Ⅳ(3個菌株)：菌絲細弱，氣生菌絲不茂盛，色淺白或淺黃色；類型V(2個菌株)：菌落粉質，氣生菌絲細弱，顏色淺黃。母本菌株Au-8的菌絲生長勢屬類型工。結果表明，供試的孢子單核菌株在菌絲生長勢方面呈現多態(tài)性。

2．2孢子單核菌株菌絲生長速度

測定結果表明，供試的木耳孢子單核菌株之間，菌絲生長速度具有一定程度的差異，菌絲平均生長速度為0．164cm／d。37號菌株菌絲生長速度最小(0．116crn)d)，91號菌株最大(0．213cm)d)，二者差異極顯著(F：0．05)。與母本菌株Au-8相比，木耳孢子單核菌株平均菌絲生長速度小于Au-8(0．184cm／d)。在測定的38個孢子單核菌株中，有11個菌株菌絲生長速度大于Au-8，2個菌株菌絲生長速度與Au-8相同，25個菌株菌絲生長速度小于Au-8。孢子單核菌株菌絲生長速度與理想雜交親本之間的關系，有待于進一步研究。

2．3孢子單核菌株交配型測定

木耳是典型的二極性異宗結合食用菌。本項研究的交配型測定結果表明，在測定的38個孢子單核菌株中，交配型A有21個菌株，交配型a有17個菌株。A：a=21：17。經X2檢驗，兩種交配型未出現1：1嚴重偏離。2．4孢子單核菌株菌絲生長勢與交配型的關系

5種類型菌絲生長勢單核菌株交配型的分析結果見表1。

表1結果表明，同一類型的菌絲生長勢，出現了兩種交配型的孢子單核菌株。經X2檢驗，除類型Ⅱ以外，其他類型單核菌株兩種交配型均未出現1：1嚴重偏離。由于實驗樣本數較少，從本表數據還不足以得出兩種交配型的孢子單核菌株菌絲生長勢在各種類型中是隨機分布或平均分布的結論。但可以說，單核菌株的菌絲生長勢與菌株交配型無明顯相關性。菌絲生長勢類型不同的親本在雜交育種中的應用價值有待于進一步研究。

2．5孢子單核菌株菌絲生長速度與交配型的關系

將孢子單核菌株菌絲生長速度人為地分成大于平均數(22株，類群1)和小于平均數(16株，類群2)2個類群。分析2個類群單核菌株的交配型，結果見表2。

表2結果表明，菌絲生長速度屬同一類群的孢子單核菌株，均出現了兩種交配型。經X2檢驗，兩種交配型均未出現1：l嚴重偏離。說明單核菌株的菌絲生長速度與交配型的關系似乎不明顯。菌絲生長速度不同的親本在雜交育種中的應用價值有待進一步研究。

3討論

3．1研究結果表明，木耳孢子單核菌株之間在菌絲生長速度和菌絲生長勢等培養(yǎng)性狀方面出現了一定程度的多態(tài)性，變異幅度較大，利用雜交育種選育優(yōu)良栽培菌株的潛力很大。說明雜交育種仍然是木耳菌種選育實用而有效的方法。在食用菌雜交育種時，一般選擇菌絲生長速度較快、菌絲生長勢較強的可親和單核菌株作為雜交親本，雜交后獲得的雙核菌株抗雜能力較強。然而，有些菌絲生長速度較慢或生長勢稍弱的單核菌株也可能具備其他優(yōu)良生產性狀。因此，科學地選擇雜交親本仍需要進行更加細致人微的系統(tǒng)研究。

3．2木耳孢子單核菌株菌絲生長勢和菌絲生長速度的多態(tài)性與其交配型無明顯相關性。這一點非常有利于雜交育種過程中具有互補優(yōu)良性狀的可親和雜交親本的廣泛選擇。培養(yǎng)性狀多態(tài)性在雜交育種中的具體應用有待于進一步研究。

3．3筆者選用一個木耳生產菌株，研究了38個孢子單核菌株的兩個基本培養(yǎng)性狀的多態(tài)性，得出了“單核菌株菌絲生長勢和菌絲生長速度與交配型無明顯相關性”的初步結論。本結論仍需要更多木耳生產菌株、更多孢子單核菌株進一步研究驗證。此外，木耳孢子單核菌株同工酶、RAPD、RFLPs等的研究將會在更深層次揭示單核菌株之間的遺傳差異和多態(tài)性，從而更科學地指導雜交育種親本的選擇。此外，如果能篩選一個或幾個可綜合反映單核菌株農藝性狀的遺傳標記，將會非常有利于雜交育種實踐。

參考文獻

[1]楊新美．中國食用菌栽培學[M]．北京：農業(yè)出版社，1988．150～151．

[2]羅信昌．木耳和毛木耳的極性研究[J]．真菌學報，1988，7(1)：56-61．

[3]羅信昌，陳大年．食用真菌核熒光染色技術的研究[J]．真菌學報，1990，9(1)：64～68．